分光光度法操作原理及定律

日期:2020-08-12 21:57:00 作者:admin

  分光光度计,有很多分支,就其基本结构来说,都是由五个基本部分组成,即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。分光光度计主要用于反射和透射测量。分三种光源:s偏振光、p偏振光和自然光。
  分光光度法是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴别物质或测定其含量的一项技术。当一束单色光通过溶液时,一部分被吸收,一部分则透过溶液。设入射光强度为io。,透射光强度为it,,则透光度t=it/io,吸光度(a)或光密度(o.d)或称消光度(e)则可表示为a=-lgt。根据lambert-beer定律,吸光度与溶液的浓度成正比,与光束通过溶液的距离(即光程)成正比,用数学表达式表示为:
  a=klc
  式中c代表该物质的浓度,l代表光程,一般以cm表示,k为摩尔消光系数,即当溶液浓度为lmol/l,光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。由于单色光透过溶液时,不仅被待测物质所吸收,而且还被比色容器与溶剂以及其它试剂吸收一部分,这部分需用空白管消除(空白液的做法即用与样本相同的一切试剂,而不含被测定的物质)
  波长的选择:
  波长的选择一般是选择待测物质zui大吸收峰的波长(λmax)。因在λmax测定吸光度,敏感度zui高。在吸收峰波长处测吸光度,波长变化影响zui小;而在其他波长处,波长变化对吸光度影响大,甚至测得浓度一吸光度曲线不呈直线。选择测定某一溶液所需的波长,是可以用不同的波长作该溶液的吸收光谱曲线,从曲线上选择zui适当的波长来进行这一溶液的测定工作。

服务热线

400-616-4686

微信服务号