关键字：分光光度计;原花青素      链接：http://www.macytech.com/article-46.html
　　一、范围
　　本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。
　　本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。
　　二、原理
　　原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度计测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。
　　三、试剂和材料
　　注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。
　　1 试剂
　　1.1 甲醇（CH3OH）。
　　1.2 正丁醇（CH3(CH2)3OH）。
　　1.3 盐酸（HCl）。
　　1.4 硫酸铁铵(NH4Fe（SO4）2·12H2O)
　　2 试剂配制
　　2.1盐酸（2 mol/L）：取盐酸90mL，加水适量使成500mL，摇匀。
　　2.2 硫酸铁铵溶液：称取10g硫酸铁铵，用2 mol/L盐酸溶解并定容至500mL，混匀，此溶液中硫酸铁铵浓度为2%（w/v）。
　　2.3 标准品
　　原花青素（葡萄籽来源），纯度≥95%。
　　2.4 标准品溶液的配制
　　原花青素标准储备液(1.0 mg/mL)：称取10 mg(精确至0.1 mg)原花青素标准品于10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。
　　四、仪器
　　1 天平：感量为 1 mg 和 0.1 mg。
　　2 分光光度计。
　　3 离心机：转速 ≥4000 r/min。
　　4 超声仪。
　　5 回流装置。
　　五、分析步骤
　　1 试样制备
　　1.1 固体试样：称取已粉碎混合均匀的待测试样50 mg~100 mg(精确至0.1 mg)，置于50 mL容量瓶中，加入30 mL甲醇，超声处理20 min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。
　　1.2 含油试样：称取混合均匀的待测试样50 mg(精确至0.1 mg)，置于小烧杯中，用20 ～30mL甲醇分数次搅拌，将提取液转移至50 mL容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。
　　1.3 液体试样：吸取不超过1 mL的待测试样，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
　　2 试样测定
　　将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取出6.0 mL置于具塞锥形瓶中，再加入0.2 mL硫酸铁铵溶液和1.0 mL试样溶液，混匀，置沸水浴回流，精确加热40 min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15 min后，于546 nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。
　　3 标准曲线制备
　　分别吸取原花青素标准储备液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各吸取1.0 mL测定，与试样测定方法相同。绘制原花青素浓度与吸光度关系的标准曲线。
　　六、分析结果表述
　　试样中原花青素测定结果按（1）式计算
　　C×V×1000
　　X= ———————————×100………………..（1）
　　m×1000×1000
　　式中： X—试样中原花青素的含量， g/100g；
　　C—由标准曲线上查出待测试样中原花青素的浓度，μg/mL；
　　V—待测试样定容总体积， mL；
　　m—试样质量，g。
　　计算结果保留三位有效数字。
　　七、技术参数
　　精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。
　　八、其他
　　本方法的定量限0.2mg/g。